| 目的 在酿酒酵母中异源表达人破骨细胞分化成熟潜在因子钠氢转运蛋白2(HsNHA2),鉴定其作为盐离子载体转运Na+的功能,并对其在细胞中的表达进行初步定位分析.方法 采用高保真PCR试剂盒扩增出HsNHA2；构建酵母表达载体,通过电穿孔的方式转入到酿酒酵母菌株中；Western印迹检测其在酵母菌株的表达；通过NaCl选择压力观察菌株在高盐环境中的生长表型,并用根皮素抑制HsNHA2观察其抗盐功能；最后用细胞原位荧光染色确定HsNHA2在细胞中的表达位置.结果 Western印迹证实HsNHA2在酵母菌株中正常表达；生长曲线显示HsNHA2可使菌株在高盐环境中生长,根皮素抑制HsNHA2表达后菌株不能在0.2mol/L NaCl培养基中生长；免疫荧光染色初步证明HsNHA2表达在细胞膜上.结论 HsNHA2作为盐离子载体在酵母细胞中主要表达在细胞膜上行使转运Na+的功能,以维持细胞正常生长. |